1.花药离体培养实验的步骤,注意事项步骤:①把花粉发育到一定阶段的花药 , 通过无菌操作技术 , 接种在人工培养基上进行离体培养;②花粉在培养基所提供的特定条件下可以发生多次分裂 , 形成类似胚胎的构造(胚状体)或愈伤组织;③诱导愈伤组织分化出芽和根 , 最后长成植株 取材:一般是离体培养花粉处于单核时期(小孢子)的花药.通过培养使它离开正常的发育途径(即形成成熟花粉最后产生精子的途径)而分化成为单倍体植株 结论:植物细胞的全能性 注意事项:必须注意整个操作过程中不应使花药受到损伤 , 若受到损伤 , 则应淘汰 , 因为损伤常常会刺激花粉壁形成二倍体的愈伤组织. 。
2.求组培用培养花粉的培养基的配方一种裸子植物花粉的离体培养方法及其专用培养基 。 该培养基配方为:蔗糖120-150g , 硼酸0.1-0.2g , 氯化钙0.1-0.3g , 用水定容至1000ml 。 培养方法是将裸子植物花粉在室温下水合20-30分钟后 , 置于所述培养基中培养16-72小时 , 花粉萌发 , 得到花粉管 。 本发明的培养基为花粉的萌发和生长提供必需的环境条件 。 用本发明的方法进行裸子植物花粉的离体培养 , 不仅快速、简单易行 , 而且培养效果好 , 可获得大量具有生活力的裸子植物花粉管 , 具有较大的实际应用价值 。
下面是植物组培的一般培养基配制:
配制培养基的具体操作
①根据配方要求 , 用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量 , 放入同一烧杯中 , 并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用 。
②将①中称好的琼脂加蒸馏水300~400毫升 , 加热并不断搅拌 , 直至煮沸溶解呈透明状 , 再停止加热 。
③将①中所取的各种物质(包括蔗糖) , 加入煮好的琼脂中 , 再加水至1000毫升 , 搅拌均匀 , 配成培养基 。
④用1N的氢氧化钠或盐酸 , 滴入③中的培养基里 , 每次只滴几滴 , 滴后搅拌均匀 , 并用pH试纸测其pH值 , 直到将培养基的pH值调到5.8 。
⑤将配好的培养基 , 用漏斗分装到三角瓶(或试管)中 , 并用棉塞塞紧瓶口 , 瓶壁写上号码 。 瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5 。
培养基的成分比较复杂 , 为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉 , 可以准备一份配制培养基的成分单 , 将培养基的全部成分和用量填写清楚 。 配制时 , 按表列内容顺序 , 按项按量称取 , 就不会出现差错 。 成分单的格式与内容见表9-2 。
3.培养基的灭菌与保存
培养基配制完毕后 , 应立即灭菌 。 培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内 , 在汽相120℃条件下 , 灭菌20分钟 。 如果没有高压蒸汽灭菌锅 , 也可采用间歇灭菌法进行灭菌 , 即将培养基煮沸10分钟 , 24小时后再煮沸20分钟 , 如此连续灭菌三次 , 即可达到完全灭菌的目的 。
经过灭菌的培养基应置于10℃下保存 , 特别是含有生长调节物质的培养基 , 在4~5℃低温下保存要更好些 。 含吲哚乙酸或赤霉素的培养基 , 要在配制后的一周内使用完 , 其它培养基最多也不应超过一个月 。 在多数情况下 , 应在消毒后两周内用完 。
3.硼对花粉管萌发的影响的实验(1)实验目的:探索硼元素对花粉管萌发情况的影响(2)
(2)实验原理:_硼能够促进花粉的萌发和花粉管的伸长
(3)实验器材:新鲜葱兰花、恒温箱、葡萄糖溶液、琼脂、硼酸溶液、稀盐酸、蒸馏水、滴管、镊子、载玻片、显微镜等 。
(4)实验步骤:
①用蔗糖和蒸馏水等配制两组培养液 , 实验组中加入硼酸(保持适宜的pH) , 对照组加入等量蒸馏水(加入少量稀盐酸以调节pH , 使之与实验组pH一致)
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