培养基灭菌将分装好的培养基放入高压蒸气灭菌锅灭菌
培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序 。 高压灭菌的原理是:在密闭的蒸锅内, 其中的蒸汽不能外溢, 压力不断上升, 使水的沸点不断提高, 从而锅内温度也随之增加 。 在0.1mpa的压力下, 锅内温度达121℃ 。 在此蒸汽温度下, 可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢 。
注意完全排除锅内空气, 使锅内全部是水蒸气, 灭菌才能彻底 。 高压灭菌放气有几种不同的做法, 但目的都是要排净空气, 使锅内均匀升温, 保证灭菌彻底 。 常用方法是:关闭放气阀, 通电后, 待压力上升到0.05mpa时, 打开放气阀, 放出空气, 待压力表指针归零后, 再关闭放气阀 。
关阀再通电后, 压力表上升达到0.1mpa时, 开始计时, 维持压力0.1-0.15mpa, 20分钟 。
到达保压时间后, 即可切断电源, 在压力到0.5mpa, 可缓慢放出蒸汽, 应注意不要使压力降低太快, 以致引起激烈的减压沸腾, 使容器中的液体四溢 。 当压力降到零后, 才能开盖, 取出培养基, 摆在平台上, 以待冷凝 。 不可久不放气, 引起培养基成分变化, 以至培养基无法摆斜面 。 一旦放置过久, 由于锅炉内有负压, 盖子打不开, 只要将放气阀打开, 大气压入, 内外压力平衡, 盖子便易打开了
灭好菌后, 让培养基自然冷却凝固 。 最好放置1 d后再使用
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