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【家庭】家庭环境下进行组培的探讨与建议

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家庭环境下进行组培的探讨与建议（下）二、进行组织培养前的准备：

1.培养容器和玻璃仪器的准备：

进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器 。 培养瓶一般使用各种果酱瓶 ， 要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时 ， 再用流水冲洗数次 。 其他的玻璃仪器同样需要这样清洁 ， 直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止 。 清洗完毕的玻璃容器要倒扣 ， 空去瓶内的水 。

清洗干净的容器要注意防尘 ， 尽量放置在玻璃柜中 。 更简单的是用干净的毛巾将容器盖住 。

移液管要用吸球来清洗 ， 反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止 ， 将移液管放置在一个长筒中 ， 便于使用 。 一般移液管只能使用一次 ， 即要清洗 ， 所以有多必要准备几只移液管 ， 建议：10ml/2支 ， 5ml/2支 ， 1ml/5支 。

2.培养基的配制：

经典的组织培养用培养基是ms配方 ， 其基本上划分为：大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物 。 这些成分的用量都在毫克级 ， 用普通天平是难以称量的 ， 为了解决这个问题 ， 我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液 ， 使用的时候按一定比例加入即可 。

下面我将一种ms培养基的母液配制方案公布如下：

大量元素：硝酸铵66.0克；

硝酸钾76.0克；

无水氯化钙13.3克；

七水硫酸镁14.8克；

磷酸二氢钾6.8克 。

以上分别溶解后合并定容到1升 ， 每配制1升标准ms培养基取25毫升 。

铁盐：七水硫酸亚铁5.56克；

乙二胺四乙酸二钠（edtana）7.46克 。

以上两种分别加热溶解 ， 混合 ， 定容到1升 ， 调整ph到5.5以下 ， 每配制一升ms取5毫升 。

微量元素和有机复合物的用量过于微小 ， 为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替 。 通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟 ， 过滤留滤液 ， 每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液 。 同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟 ， 过滤留滤液 ， 每升ms加入50~100毫升即可 。

加入上述各组分后 ， 每升ms培养基还需要加入白砂糖30克 ， 琼脂7克 。 这里要说明的是 ， 糖和琼脂都是可变的量 ， 要根据需要调整 。 另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂 ， 透明度更好 。

上述各成分加入后 ， 定容到800毫升左右 ， 用微波炉加热 ， 直到琼脂全部溶解为止 。 此时加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液 ， 这样每取1毫升 ， 换算到培养基中就是1ppm） 。 然后加水定容到1100毫升（1.1升） ， 之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗 。 最后用酸碱调整ph到5.8~6.0 。

3.使用ms原粉配制培养基：

目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉 ， 大大简便了培养基的配制 ， 根据不同公司的说明选择培养基的种类 。 下面就以泛生化学品公司的ms原粉为例：泛生化学品公司生产的ms培养基原粉 ， 包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和支持物 ， 他们的支持物是一种人工合成的半乳糖硫酸脂——polygal ， 这种物质作为支持物虽然提高了成本 ， 但是无论是透明度还是强度都优于琼脂 ， 更重要的是ploygal对组织的褐变有一定的抑制作用 ， 对初学者尤为重要 。 一般称取ms原粉40克 ， 加水800毫升 ， 微波炉加热溶解 ， 加入激素 ， 定容到1100毫升（1.1升） ， 调整ph值到5.8~6.0 。

值得指出的是polygal还有一个特点 ， 他对ph和灭菌时间的敏感性很强 ， 如果培养基配制和灭菌出现问题 ， 他会变色来提醒实验者培养基出现问题 ， 这个也对初学者有一定的帮助 。 泛生公司也提供纯品polygal供研究使用 。

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