RNA提取原理
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:
Trizol是一种总RNA抽提试剂 ， 内含异硫氰酸胍等物质 ， 能迅速裂解细胞 ， 抑制细胞释放出的核酸酶活性 。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA 。
Trizol作用原理:
在匀质化或溶解样品中 ， Trizol试剂可保持RNA的完整性 ， 同时能破坏细胞及溶解细胞成分 。加入氯仿离心后 ， 裂解液分层成水相和有机相 。RNA存在于水相中 。
水相转移后 ， RNA通过异丙醇沉淀回收 。移去水相后 ， 用乙醇可从中间相沉淀得到DNA ， 加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质 。
抽提RNA的使用目的
RNA用于不同的后续实验 ， 其质量要求不尽相同 。
cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留；
【RNA提取原理】Northern对RNA完整性要求较高 ， 对酶反应抑制物残留要求较低；
RT-PCR对RNA完整性要求不太高 ， 但对酶反应抑制物残留要求严格 。因此 ， 明确实验目的是进行后续实验的首要条件 。
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