过滤灭菌一些生长调节剂 ， 如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素是不耐热的 ， 不能用高压灭菌处理 ， 通常采用过滤灭菌方法 。 可用无菌的孔径0.20-0.45um的硝酸纤维素膜过滤菌类 ， 当溶液通过滤膜后 ， 细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻 ， 在需要过滤灭菌的液体量大时 ， 常使用抽滤装置；液量小时 ， 可用注射器 。 使用前对其高压灭菌 ， 将滤膜装在注射器的靠针管处 ， 将待过滤的液体装入注射器 ， 推压注射器活塞杆 ， 溶液压出滤膜 ， 从针管压出的溶液就是无菌溶液 。
紫外线和熏蒸灭菌?紫外线灭菌 在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯灭菌 。 紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌 ， 细菌吸收紫外线后 ， 蛋白质和核酸发生结构变化 ， 引起细菌的染色体变异 ， 造成死亡 。 紫外线的波长为200—300nm ， 其中以260nm的杀菌能力最强 ， 但是由于紫外线的穿透物质的能力很弱 ， 所以只适于空气和物体表面的灭菌 ， 而且要求距照射物以不超过1.2m为宜 。
熏蒸灭菌 用加热焚烧、氧化等方法 ， 使化学药剂变为气体状态扩散到空气中 ， 以杀死空气和物体表面的微生物 。 这种方法简便 ， 只需要把消毒的空间关闭紧密即可 。 常用熏蒸剂是甲醛 ， 熏蒸时 ， 房间关闭紧密 ， 按5—8ml／m3用量 ， 将甲醛置于广口容器中 ， 加5g/m3高锰酸钾氧化挥发 。 熏蒸时 ， 房间可预先喷湿以加强效果 。 冰醋酸也可进行加热熏蒸 ， 但效果不如甲醛 。 化学消毒剂的种类很多 ， 它们使微生物的蛋白质变性 ， 或竞争其酶系统 ， 或降低其表面张力 ， 增加菌体细胞浆膜的通透性 ， 使细胞破裂或溶解 。 一般说来 ， 温度越高 ， 作用时间越长 ， 杀菌效果越好 。 另外 ， 由于消毒剂必须溶解于水才能发挥作用 ， 所以要制成水溶状态 ， 如升汞与高锰酸钾 。 还有消毒剂的浓度一般是浓度越大 ， 杀菌能力越强 ， 但石炭酸和酒精例外 。
喷雾灭菌物体表面可用一些药剂涂擦、喷雾灭菌 。 如桌面、墙面、双手、植物材料表面等 ， 可用70%的酒精反复涂擦灭菌 ， l%-2%的来苏儿溶液以及0.25%—1%的新洁尔灭也可以 。
3、 无菌操作
植物组织培养是一种无菌技术 ， 因此不仅要求整个操作过程 ， 一切用具、材料、培养基、培养室、工作人员的衣物都要无菌 ， 而且要求工作人员在操作过程中要遵守无菌操作的规程 ， 如少有疏忽 ， 都会造成无法挽回的后果 ， 使工作前功尽弃 。 工作人员在进行无菌操作是要严守以下几点：
a.入无菌室前 ， 要洗手 ， 去掉指甲中的污物 。
b.入室时要穿上经过消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等 。
c.操作前要用70的酒精擦洗工作人员的手 ， 操作中要经常用酒精擦洗手 。 不准讲话 ， 亦不准对着操作区呼吸 ， 以免微生物污染材料、培养基和用具 。 每次重新操作都要把工具在火焰上消毒 。
d.必须在酒精灯火焰处进行操作 ， 如打开瓶口 ， 转接材料 。 盖瓶盖前应将瓶口在火焰上烧一下 ， 再将盖子也在火焰上烧一下 ， 然后盖上 。
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