杜鹃花组织培养 , 从接种到诱芽产生 , 所需的时间明显长于月季和菊花等 , 故其继代增殖培养的周期也较长 。 试验中分别以30天和45天为培养周期进行了统计 , 在各激素水平配比处理中 , 其增殖芽总数 , 培养45天要比培养30天的高出50%至80% 。 所以 , 杜鹃花组培过程中 , 过于频繁地切割、转换培养 , 反达不到快繁的目的 。
三、试管苗的生根培养及移栽
杜鹃花的生根培养虽不十分困难 , 但对培养基的要求仍与一般植物不同 。 其一 , 基本培养中无机盐大量元素的用量不能减半;其二 , 蔗糖的用量仍为30g/L , 生长素NAA的添加量以1.5至2.0mg/L为好 , 培养45天时的生根率为60%左右 。
供生根培养的试管苗 , 要求高15厘米以上 , 具7片以上真叶 , 发育健壮 。 生根培养2周后始见发根 , 6周时达最高生根率 。 试验中曾发现 , 在增殖培养过程中用KT或6-BA取代ZT时 , 虽诱芽、增殖效应较差 , 但芽条发育较粗壮 。 因此 , 在增殖培养达到一定群体数量后 , 用KT或6?BA进行继代培养处理 , 可使生根率和移栽成活率明显提高 。 此外 , 在生根培养基中添加2g/L的活性炭 , 可使试管苗个体发育显著增强 , 1个月后生根率可达到90%以上 。
国外的研究资料表明 , 某些常规繁殖(扦插)极难生根的植物 , 经组织培养后获得的试管苗 , 生根会容易很多 。 有些可不经生根培养直接移植到生根介质中 , 生根率可达100% , 3至4周后即可移入温室进行盆栽 。 这种生根介质为泥炭土、蛭石、珍珠岩的混合物 , pH以4至4.5为宜 。
生根试管苗的移栽入土 , 栽培基质为1∶1的泥炭生+蛭石混合物 。 表层要求过筛 , 以利根系附着;下层铺粗粒 , 以利基质渗水 。 移栽时用镊子去掉根部附着的培养基(不可损伤根系) 。 用镊尖将基质拨一小洞 , 把根系放入 , 覆土 , 轻轻压实 , 浇足水 。 试管苗移栽成活的关键是保证一定的温、湿条件 , 移栽环境和试管培养时的条件相差悬殊 , 常造成移栽苗生长不适或死亡 。
试管生根苗的移栽虽然在全年均可进行 , 但在不具备生根室的情况下 , 仍以春、秋两季进行较为稳妥方便 。
四、组培技术在杜鹃花新品种选育中的应用
试验初期 , 鉴于杜鹃花外植体灭菌困难 , 可供试验的接种群体太小 , 不能满足正常试验的进行 。 为尽快筛选出合适的培养基配方及相应的培养条件 , 笔者结合杂交育种 , 采用杂交种子试管发芽的方法 , 再用试管实生苗的上胚轴为外植体进行研究 , 取得了事半功倍的效果 。 笔者发现 , 杜鹃花的杂种实生苗常规播种繁殖需3至5年才能开花 , 而经上胚轴培养的杂种实生苗 , 移栽后第二年即可开花 , 大大缩短了杂种实生苗的童期 , 对加快显花、结果类植物的育种进程具有重要意义 。
一般来说 , 种子的灭菌处理较其他器官或组织容易得多 。 杜鹃花杂交种子的灭菌处理为:70%酒精表面浸泡1分钟 , 灭菌水漂洗后转0.1%升汞液浸泡10分钟 , 灭菌水漂洗3次 , 每次1分钟以上 。 灭菌后再剖实取籽、接种培养 , 接种两周始见发芽 。 出苗后取用上胚轴进行诱芽快繁 , 繁殖系数较高 。 成苗后 , 可取茎尖或茎节再培养 , 培养条件和方法同前 。 国内组织培养涉及新品种选育的不多 , 特别是在观赏园艺植物方面 。 从发展的角度看 , 组培技术要保持较强的生命力 , 就不该离开新品种的选育 。 因此 , 有机地将组培技术与杜鹃花新品种选育结合起来 , 对提高绿地植物景观的建设水平、促进杜鹃花的产业化发展 , 都是十分有益的 。
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