（3）培养条件
培养温度应大致与该植物原产地生长所需的最适温度相似 。 喜欢冷凉的植物 ， 以20℃左右较好 ， 热带作物需在30℃左右的条件下才能获得较好的生长 。 如香石竹在18-25℃随温度降低生长速度减慢 ， 但苗的质量显著提高 ， 玻璃化现象减少 ， 高于25℃时 ， 引起苗徒长细弱 ， 玻璃化或半玻璃化苗明显增加 。 另在桉树继代培养中发现 ， 如果总在23-25℃条件下培养 ， 芽就会逐渐死亡 ， 但如果每次继代培养时 ， 先在15℃下培养3d ， 再转至25℃下培养 ， 生长良好 。
（4）继代周期
对一些生长速度快或者繁殖系数高的种类如满天星、非洲紫罗兰等 ， 继代时间比较短 ， 一般不超过15d 。 对生长速度比较慢的种类如非洲菊、红掌等 ， 继代时间就要长一些；30-40d继代1次 。 继代时间也不是一成不变的 ， 要根据培养目的、环境条件及所使用的培养基配方进行考虑 。 在前期扩繁阶段 ， 为了加快繁殖速度 ， 当苗刚分化时就切割继代 ， 而无需待苗长到很大时才进行继代 。 后期在保持一定繁殖基数的前提下 ， 进行定量生产时 ， 为了有更多的大苗可以用来生根 ， 可以间隔较长的时间继代 ， 达到既可以维持一定的繁殖量 ， 又可以提高组培苗质量的目的 。
（5）继代次数
继代次数对繁殖率的影响因培养材料而异 。 有些植物如葡萄、黑穗醋栗、月季和倒挂金钟等 ， 长期继代可保持原来的再生能力和增殖率 。 有些植物则随继代次数而增加变异频率 ， 如继代5次的香蕉不定芽变异频率为2.14% ， 继代10次后为4.2% ， 因此香蕉组培苗继代培养不能超过1年 。 还有一些植物长期继代培养 ， 会逐渐衰退 ， 丧失形态发生能力 。 具体表现为生长不良 ， 再生能力和增殖率下降等 。
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