pcr检测 PCR 检测不准这个锅“我”不背阳性

对于大量进行PCR的实验室来说，移液器污染导致假阳性的情况并不少见。聚合酶链反应，尤其是逆转录聚合酶链反应，已逐渐成为疾病诊断的标准方法。例如，逆转录聚合酶链反应的结果是新冠肺炎最近疫情的诊断标准之一。
对于PCR检测来说，实验室设备污染造成的假阳性结果不容忽视。特别是在样本量很大、PCR仪器连续工作的时期，检测室往往是密闭环境，气溶胶弥漫，仪器容易污染。
移液器往往是离样品最近、使用频率最高的仪器，无论是在移液过程中还是在操作环境中，都非常容易被污染。受污染的移液器可能会将受污染的样品或核酸引入后续样品或聚合酶链反应系统，导致信号检测和假阳性结果。
我们如何减少污染？
边肖教你如何清洁移液器，以降低因移液器污染而导致假阳性的风险。

从德国布兰德转移移液器
移液器污染容易导致PCR实验假阳性的风险，污染分为两种类型:
机身外污染。
通常，由于离心、振动或聚合酶链反应加热，气溶胶会在实验环境中扩散并污染机身外部。或者在操作过程中，如果机身外侧不小心碰到离心管内壁，可能会污染移液管。在后续实验中，可能会不小心触碰到样本管和离心管，可能会造成假阳性风险。
反吸或吸入过程中吸入造成的气溶胶污染。
如果操作样品时不使用过滤咀，出现误操作，导致样品被吸进移液管，没有及时清洗，可能会污染后面的样品，造成假阳性风险。吸入液体时不可低估气溶胶污染。以20 μL移液器为例，当室温为20℃，相对湿度约为60% RH时，吸液过程中的蒸发速率可达0.046 μL/s，相当于每秒蒸发总移液量的0.23%。在这种情况下，如果不使用过滤嘴，蒸发的液体不可避免地会进入移液管的下半部分，并在后续操作中吹入后续样品，从而导致假阳性风险。
回吸或意外接触样本管内壁后，立即停止清洗操作。定期清洗可以减少气溶胶污染。
我们如何更好地拆卸和清洁移液器？
以德国BRAND制造的TransferpetteS移液器为例，该移液器具有易拆卸、易维护、易更换配件、校准技术简单等优点，无需工具即可校准移液器。转移移液管可在121℃高压灭菌，特别适用于聚合酶链反应实验。
具体操作步骤如下:
一个
用75%乙醇或异丙醇擦拭移液器的外表面，进行基本清洁和消毒

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2
旋转下半部分拆下下半部分，旋转拆下活塞、弹簧密封圈、尖锥套和弹性尖套。

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三
将所有零件浸入75%乙醇或异丙醇中30分钟。取出后用去离子水冲洗干净。

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四
将所有零件放入装有清洁剂的超声波清洗机中进行超声波清洗10分钟，取出后用去离子水冲洗干净。

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五
根据核酸污染的严重程度，可将尖锥套、活塞等配件浸泡在甘氨酸-盐酸缓冲液中过夜。取出后用去离子水冲洗干净。
甘氨酸-盐酸缓冲液制备方法:取30.6 g NaCl和39.2 g甘氨酸，加入去离子水定容至523 mL，加入477ml 1n HCl，制成10×缓冲液。使用时以1:10稀释。严重污染的密封圈应更换。